科维创CCK-8细胞增殖检测试剂盒
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 18:56 

科维创CCK-8细胞增殖检测试剂盒
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提供商: 科维创
产品简介
 
CCK试剂盒是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)(图1-2) ,其颜色的深浅与存活细胞数目成正比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,可以间接反应活细胞的数量。
 
CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

图1. WST-8和WST-8甲攒结构图  

图2. CCK-8检测细胞活性原理

产品优势
 
检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK法
甲臜产物的水溶性 差(需加有机溶剂溶解后再检测)
产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用
检测灵敏度 很高 很高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高,细胞形态完全消失 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷
  注:1、酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;
  2、本试剂盒细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。



毒性测试
 
1、在96孔板中配置100 μl的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2、向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
4、向每孔加入10 μl CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
注:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
 
 
细胞活性检测
 
1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μl/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃, 5% CO2)。
2、向每孔加入10 μl CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
 
5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
 
 
 
注意事项
 
1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
2)有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
3)白细胞可能需要培养较长时间。
4)当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
5)如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
6)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
 
活力计算:
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
 
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 
 
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