慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 18:56 

慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus
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提供商: 和元上海
服务名称: 慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus
规格: TU/ml

慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus

 

和元上海提供的慢病毒(Lentivirus)的生产和指控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的慢病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对慢病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们生产的慢病毒滴度在108-109TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

 

慢病毒载体是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,基因组为RNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。

慢病毒作用机制

慢病毒包装和感染过程

慢病毒与腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒载体相比,具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。慢病毒包装主要用于难转染细胞的感染,稳转株的制备,神经系统的定位注射实验。难转染的细胞主要包括干细胞、免疫细胞(如DC细胞)、肿瘤细胞等,此外,慢病毒还可以感染仓鼠胚胎制备转基因动物。

 

慢病毒感染细胞时,由于细胞的来源、代数和细胞状态等因素的影响,MOI值在不同实验室也略有差异,下面我们提供公司部分细胞的慢病毒MOI感染参数,供实验参考(以下数据是细胞感染效率在80%细胞状态良好的情况下获得的):

 
表1 不同细胞的MOI值参考
细胞名称 细胞来源 MOI值
A-375 人恶性黑色素瘤细胞 10
A549 人肺腺癌细胞 10
PANC-1 人胰腺癌细胞 10
NCI-H1299 人肺腺癌细胞 10
Saos-2 人骨肉瘤细胞 10
MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 40
SW620 人结肠癌细胞 40
T24 人膀胱癌细胞 20
Ca Ski 人宫颈癌肠转移细胞 10
MG-63 人骨肉瘤细胞 50
 

慢病毒的感染特点除了感染细胞类型广以外,慢病毒还具有体内外同时使用、表达起始时间短、基因容量比较大等特点,常用于神经、肿瘤、转基因动物制备等,目前也较为被广泛使用。

慢病毒感染案例  

慢病毒UbiC-EGFP感染胚胎细胞构建转基因仓鼠

病毒相关技术服务:

病毒包装服务     腺相关病毒包装     慢病毒包装    腺病毒包装     逆转录病毒包装

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